蛋白快速銀染試劑盒

貨號(hào)：P1027-20T

存儲(chǔ)條件：常溫，6個(gè)月有效

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

蛋白快速銀染試劑盒是一種快速的可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白銀染染色的試劑盒，該試劑盒含有增敏步驟，可明顯降低背景。其優(yōu)點(diǎn)還在于：1、操作簡(jiǎn)單快速；2、用于2D凝膠的銀染，并可進(jìn)行后續(xù)的質(zhì)譜檢測(cè)；3、目的條帶清晰：4、不含甲醇。

蛋白快速銀染試劑盒操作速度更快。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、水平搖床或側(cè)擺搖床

2、去離子水（超純）

3、乙醇、冰乙酸

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備工作：以下操作以 8.5x5.5cm、 厚度為 1.0mm 的凝膠為例，以凝膠全部浸沒到溶液為準(zhǔn)，一股用量是 25ml，對(duì)于凝膠體積較大的，各溶液的使用量需按凝膠體積比例放大。整個(gè)銀染過程應(yīng)在搖床上進(jìn)行，搖床轉(zhuǎn)速控制在 60~70rpm。提前配制固定液即按無水乙醇冰乙酸;去離子水=5-1:4的比例配制。提前配制洗滌液，即按無水乙醇;去離子水=1:4的比例配制。

2、水洗：電泳結(jié)束后，取凝膠放入去離子水中清洗2次，每次5min.

3、固定：取凝膠放入50~100ml 固定液中，在搖床上室溫?fù)u動(dòng) 15~20min，重復(fù)固定步驟1次。

4、洗脫：取凝膠放入洗滌液中清洗2 次，每次 5min。

5、水洗：去離子水清洗凝膠2次，每次 5min。

6、增敏：配制銀染增敏工作液，即取 Silver Stain Sensitizer(500 x)0.1ml 加入到 50ml去離子水中，混勻，即為 1×Silver Stain Sensitizer，一般應(yīng) 2h 內(nèi)用完。室溫下用 1xSilver Stain Sensitizer 育凝膠 2min，立即用去離子水清洗凝膠2次，每次1min。

7、銀染：配制銀染工作液，即取Silver Stain(100 x)0.5m1 加入到50ml 去離子水中，混勻，即得 1× Silver Stain，一般應(yīng) 2h 內(nèi)用完。 取凝膠入 1 xSilver Stain， 在搖床上室溫?fù)u動(dòng) 10~20min。

8、水洗：棄液，在搖床上用去離子水清洗凝膠 2 次，每次 30s， 搖動(dòng)速度在 60~ 70rpm總的水洗時(shí)間應(yīng)控制在 1.5min 內(nèi)。

9、顯影：配制銀染顯影工作液，即取 Silver Stain Developer(5x)10ml 加入到 40ml 去離子水中，混勻，即為 1x Siver Stain Developer,一般應(yīng)30min內(nèi)用完。清洗凝膠后，立即置于 1x Silver Stain Developer 中，室溫聯(lián)育2~10min，直至蛋白條帶清晰可見。

般顯色305/后就會(huì)出現(xiàn)棕色沅淀，繼續(xù)顯影 2-3min， 亦可延長(zhǎng)至 5min 以上，如果顯影效果不佳，可重新更換 1xSilver Stain Developer繼續(xù)顯影。

10、迅速用去離子水清洗凝膠以避免顯影過度，背景染色。立即加入銀染終止液，搖床上搖動(dòng) 10min，以終止顯色反應(yīng)。（配制銀染終止液，即取 Silver Stain Stop Buffer(10x)10ml加入到 90ml 去離子水中，混勻，即為 1x Silver Stain Stop Buffer，一般應(yīng) 24h 內(nèi)用完。)

11、保存：棄終止液，加入去離子水50ml，搖床上搖動(dòng)2-5min，棄液。短期保存于新鮮去離子水，長(zhǎng)期保存可制備干膠。

注意事項(xiàng)

1、背景過深：①顯色時(shí)間過長(zhǎng)；②洗滌不充分：③凝膠中殘留物質(zhì)未去除干凈；④去離子水的純度過低！

2、蛋白條帶較淺：①蛋白的半guang氨酸含量過低：②銀染后水洗時(shí)間過長(zhǎng)：③蛋白量較低;④固定后的洗滌時(shí)間不夠，導(dǎo)致乙酸殘留。

3、凝膠上出現(xiàn)雜質(zhì)或非蛋白的印跡：①凝膠沒有被充分漫沒，應(yīng)加入足量溶液：②容器沒有清洗干凈；③凝膠接觸金厲物質(zhì)；④指紋或其他壓跡。